Assay til dannelse af erytrocytkranser på rotter

B-lymfocytter er involveret i antistofsyntese og er effektorceller med humoralt immunrespons. Overfladen af ​​B-celler bærer membranoverfladeimmunoglobulin (SmIg), Fc-receptorer og komplementreceptorer. Det binder stærkt til Fc-delen af ​​antigen-antistofkomplekset. Røde blodlegemer fra kylling eller får får udvalgt og sensibiliseret i EA-komplekser med tilsvarende anti-erythrocytantistoffer. Fc-receptoren for B-celler kan danne en krans med EA, der kaldes EA-krans. Hvis EA-komplekset tilsættes til komplement og binder til komplementreceptoren for B-celler, dannes en EAC-rosette. Der er murine RBC-receptorer på overfladen af ​​B-celler, som kan binde til RBC-mus til dannelse af muserytrocyt-rosetter (M-RFC), som hovedsageligt binder til B-celler med IgM-receptorer, og M-RFC'er er for det meste naive B-celler. Denne test bruges hovedsageligt til at detektere antallet af B-lymfocytter og til at bestemme niveauet for humoral immunitet. Grundlæggende information Specialistklassificering: undersøgelsesklassificering: blodundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Procentdelen af ​​ME-rosetter var imidlertid reduceret eller fraværende uden agammaglobulinæmi og alvorlig kombineret immunsvigt. Normal værdi: Procentdel af ME i perifert blod af kvinder: 5% -10% Over normal: Procentdelen af ​​ME-kranser i perifert blod hos patienter med kronisk lymfocytisk leukæmi er så høj som 60% til 80%. Negativ: positiv: Tip: Slap af, når du tjekker. Normal værdi Resultater 200 lymfocytter blev talt under mikroskopet. Lymfocytterne, der adsorberede 3 eller flere musrøde blodlegemer, var B-lymfocytter, og procentdelen af ​​musecelle-kranser (ME-kranser) blev beregnet. Procentdelen af ​​ME-rosette i normalt humant perifert blod er 5% til 10%. Klinisk betydning Procentdelen af ​​ME-kranser i perifert blod hos patienter med kronisk lymfocytisk leukæmi er så høj som 60% til 80%, men der er ingen gammaglobulinæmi, svær kombineret immunbrist osv., Og procentdelen af ​​ME-kranser er reduceret eller fraværende. Lavt resultat kan være sygdomme: X-bundet ingen gammaglobulinæmi hos børn, høj forekomst af sekundær immunsvigt hos børn kan være sygdom: forholdsregler for kronisk lymfocytisk leukæmi (1) Inkubationstid: Procentdelen af ​​ME steg gradvist med inkubationstiden. Efter inkubation i 1 time var ME-procentdelen 7,4 ± 3,1%, og inkubationen blev øget til 18,3 ± 3,8% efter 18 timer. Efter 72 timers inkubation blev antallet af kranser forøget. Det faldt gradvist til 3,4 ± 7,1%. (2) Kulturopløsning: Det er bedst egnet at bruge Tc199 kulturopløsning, og resultaterne og gentageligheden er god. Vask og resuspenderende lymfocytter og røde blodlegemer med Hepes-bufret RPMl1640-medium resulterede i celler, der havde tendens til at aggregeres og dannede store celler, hvilket resulterede i upålidelige resultater. (3) Når det optimale forhold mellem røde blodlegemer og lymfocytter er ca. 35: 1, er forholdet> 60: 1, eller forholdet er <25: 1, kan antallet af ME-kranser reduceres. (4) Konservering af MRBC-kulturopløsning: I Alsever-opløsning producerer MRBC opbevaret ved 4 ° C i 1 uge stadig et stabilt antal kranser, mens MRBC opbevares i PBS, saltvand eller Tc199 kulturmedium, med lagringstiden forlænget, antallet af kranser Gradvis efter 72 timers opbevaring kan der kun ses små eller kransedannende celler. Inspektionsproces (1) Tag 1 ml af den ovennævnte musrøde blodcellsuspension, tilsæt 3 ml fysiologisk saltvand, bland godt, 1500 r / min, centrifuger i 10 minutter, vask i alt 3 gange og tilbered til sidst 1% musrød blodcellsuspension med fysiologisk saltvand (ca. 1,4 × 108 celler / ml). (2) 1,5 ml heparin blev taget til antikoagulation, lymfocytter blev adskilt ved lymfocytstratificering, og cellekoncentrationen blev indstillet til 2 x 107 / ml med 20% kalveserum Hank-opløsning. (3) Tag 0,1 ml lymfocyt-suspension, tilsæt en lige stor mængde af 1% musrød blodcellsuspension, bland og anbring i et 37 ° C vandbad i 10 minutter, 500 r / min, centrifuger i 10 minutter, læg 4 ° C køleskab i 2 til 3 timer. (4) Pipetter 0,05 ml supernatant, tilsæt 1 dråbe 2 g / L blå opløsning, drej forsigtigt til blanding, tag 1 dråbe af blandingen på objektglaset, dæk dækslet, efter at cellerne er synket, Kontroller med et højeffektmikroskop. Ikke egnet til mængden Der er ingen upassende skare. Bivirkninger og risici Det er en sikker kontrol og er ufarlig for kroppen.