hæmoglobinelektroforese

Forskellige isoelektriske punkter af forskellige hæmoglobin har forskellige positive og negative ladninger i en bestemt pH-buffer, og hæmoglobinet bevæger sig i forskellige retninger efter elektroforese. Grundlæggende information Specialistklassificering: klassifikation af vækst- og udviklingsundersøgelse: blodundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Tip: Før undersøgelsen er kosten let, og alkohol er forbudt. Normal værdi Elektroforesemetoden var HbA 95%, HbA 21,1% til 3,2% og HbA 32% til 3%. Singer-metoden har en HbF <4%. Klinisk betydning 1, er hovedkomponenten HbS, og ingen HbB kan ses ved seglcellehemoglobinsygdom. 2 steg HbS, HbF og HbA2 lidt, mens HbA sjældent eller forsvandt kombineret med undersøgelsen kan diagnosticeres som HbS-β-marin anæmi, mere almindeligt i Middelhavet. 3, ud over HbS, der indeholder 10% -30% HbA og lidt forøget HbF og HbA2, kan HbS-p-marin anæmi også overvejes. 4. HbS tegner sig for 20% -30%, HbA tegner sig for 65% -75% og indeholder normal HbF og HbA2, som kan diagnosticeres som HbS-a-marin anæmi. 5, HbA forsvinder, HbC tegner sig for 28% -44% af det samlede hæmoglobin, kan diagnosticeres som hæmoglobinsygdom, mere almindeligt hos sorte mennesker, flere målceller kan ses i blod. 6, der er HbS, HbD vises også, der er målceller i blodfilmen, kan diagnosticeres som hæmoglobin D sygdom, mere almindelig i det nordlige Kina. 7, HbE resulterer i elektroforese, kan diagnosticeres som hæmoglobin E sygdom, hovedsageligt findes i Sydøstasien, Indien osv., Kina er mere almindeligt i det sydlige Guangdong. Forholdsregler Voksen syrefibermembranelektroforese direkte kolorimetri Reagens: Elektroforese med mikro-hæmoglobin af celluloseacetatmembran. operation: (1) Celluloseacetatmembranen blev skåret i 1/3 (4 cm x 8 cm) i TEB-puffer i 10 minutter eller mere. (2) Fjern celluloseacetatfilmen, og brug et filterpapir til at fjerne overskydende vand. 10 ul 100 g / L opløst blod blev absorberet af en Hb-pipette og påført ensartet på den nedre kant af glaspusheren og blev anbragt på den matte side i en afstand fra 1,5 til 2,0 cm fra filmens katodeende. Lav to eksemplarer af hvert eksemplar på samme tid. (3) Elektroforese: Pufferen elektroforeseres med en spormængde af hæmoglobin. Spændingen er 180V, og tiden er 40min ~ 1h. (Cellerne er tydeligt adskilt i hver zone.) Efter elektroforesen udskiftes elektroderne, og bufferen kan bruges gentagne gange. (4) Eluering og kvantificering HbA, HbA2 og en kontrolzone svarende til størrelsen på HbA2 blev skåret separat. Hvis der også skæres unormale Hb-zoner (HbX), placeres de i de tilsvarende rør. Tilsæt 10 ml TEB-puffer til HbA-røret, tilsæt 2 ml TEB-puffer til hvert rør, blødlægges i 30 minutter, rystes konstant. Efter at være blevet fuldstændig elueret. Eluatet blev blandet og 721 spektrofotometer med en bølgelængde på 413 nm. Emnet nulstilles, og absorbansen af ​​hvert rør måles. Inspektionsproces (1) Elektroforese af sporhæmoglobin: 1 Dip-film: Celluloseacetatfilmen flyder på overfladen af ​​TEB-puffer, og den kan bruges i mindst 20 minutter, efter at den er jævnligt gennemvædet og sunket. Dette forhindrer, at der genereres bobler. 2 Punkt: Fjern celluloseacetatfilmen, og brug filterpapir til at fjerne overskydende vand. Hemoglobinopløsningen blev aspireret i en mikropipette og anbragt i en konkav rille fra en applikator med flere prøver.Hæmoglobinopløsningen blev taget af en pipette med flere prøver og plettet på en mattside af celluloseacetatfilmen. 1,5 til 2 cm fra katodeenden, mængden af ​​plettering er ca. 3 til 5 μl, og den normale hæmoglobinopløsning i den parallelle position bruges som kontrol. 3 Elektroforese: Tilsæt en lige mængde BB-bufferopløsning i buffertanken på begge sider af mikroelektroforesetanken, og brug et to-lags filterpapir som en saltbro på celluloseacetatmembranstøtten. Filmen var mat til bunden, og den negative elektrode blev afsluttet med en plet og ækvilibreret i 5 minutter. Tænd for strømmen. Spændingen er 180V, den aktuelle mængde er ca. 0,2 mA / cm, og elektroforese-tiden er 20-30min. Bufferen i tanken kan bruges igen efter at elektroderne er skiftet. 4 Farvning: Den elektroforesede film blev taget ud i den Ponceau røde farvningsopløsning i ca. 10 minutter og skyllet med 3% eddikesyre flere gange, indtil baggrunden var hvid og tørret. 5 Gennemsigtig: Celluloseacetatfilmen blødlægges i en gennemsigtig væske, klæbes til en ren glasplade, og boblerne mellem de to fjernes med en glasstang. En lille mængde iseddike blev hældt i en kromatograficylinder, og glaspladen blev omvendt dækket på kromatograficylinderen (med filmen vendt indad). Røg med flygtig iseddike i 10 til 20 minutter, og fjern filmen, når den er gennemsigtig. (2) Celluloseacetatmembranelektroforese farvning kolorimetrisk metode: 1 Fjern den 4 cm × 6 cm celluloseacetatmembran, der er gennemvædet i TEB-puffer, og blød overskydende vand ud med filterpapir. I en afstand på 1,5 cm fra katodenden af ​​den matte overflade blev ca. 5 ul af en 50 g / L Hb-opløsning lineært og ensartet pakket med en hæmoglobinpipette. Efter at hæmoglobinopløsningen trængte ind i membranen, blev membranen vendt på en filterpapirbro på elektroforesetankens understøttelsesplade. 2 Elektroforese: spænding 180V, tid 30 ~ 40min, med forbehold for fuldstændig adskillelse af Hb-zoner. Elektroden udskiftes efter elektroforese, og elektroforesebufferen kan bruges flere gange. 3 Farvning: Filmen nedsænkes i farvningsopløsningen. Den skal farves i 2 timer om vinteren og 25 ~ 30 ° C om sommeren. Den kan kun farves i ca. 30 minutter. Bemærk, at hvis farvningen ikke er gennemsigtig (som f.eks. Tiden er for kort, eller hæmoglobinopløsningen er for koncentreret), eller spændingen er for høj, er HbA-båndet for koncentreret, og båndet afdrives let, hvilket påvirker kvantificeringens nøjagtighed. Vask med blegningsløsning flere gange, indtil baggrunden er skyllet. 4 Kvantificering: Den skyllede membran blev taget ud, og hver zone blev skåret, og en kontrolzone svarende til størrelsen på HbA2 blev anbragt i hvert tilsvarende reagensglas. 10 ml udvaskning blev sat til HbA-røret, og de resterende rør blev nedsænket i 2 ml, gennemvædet i 20 minutter og rystet fra tid til anden. Lav båndet helt elueret (bemærk at ved højere temperaturer bør elueringstiden ikke være for lang, ellers elueringsblåt vil falde og gradvist blive lilla). Eluatet blev blandet, og absorbansen af ​​hvert rør blev målt ved anvendelse af et 721 spektrofotometer ved en bølgelængde på 620 nm og nulstilling med et emne. 5 beregning: den samme direkte kolorimetri. Voksen syrefibermembranelektroforese direkte kolorimetri Reagens: Elektroforese med mikro-hæmoglobin af celluloseacetatmembran. operation: (1) Celluloseacetatmembranen blev skåret i 1/3 (4 cm x 8 cm) i TEB-puffer i 10 minutter eller mere. (2) Fjern celluloseacetatfilmen, og brug et filterpapir til at fjerne overskydende vand. 10 ul 100 g / l opløst blod blev absorberet af en Hb-pipette og påført ensartet på den nedre kant af glaspusheren og blev anbragt på den matte side i en afstand fra 1,5 til 2,0 cm fra filmens katodeende. Lav to eksemplarer af hvert eksemplar på samme tid. (3) Elektroforese: elektroforese af buffer og mikrohemoglobin. Spændingen er 180V, og tiden er 40min ~ 1h. (Cellerne er tydeligt adskilt i hver zone.) Efter elektroforesen udskiftes elektroderne, og bufferen kan bruges gentagne gange. (4) Eluering og kvantificering HbA, HbA2 og en kontrolzone svarende til størrelsen på HbA2 blev skåret separat. Hvis der også skæres unormale Hb-zoner (HbX), placeres de i de tilsvarende rør. Tilsæt 10 ml TEB-puffer til HbA-røret, tilsæt 2 ml TEB-puffer til hvert rør, blødgør i 30 minutter, ryst konstant. Efter at være blevet fuldstændig elueret. Eluatet blev blandet og 721 spektrofotometer med en bølgelængde på 413 nm. Emnet nulstilles, og absorbansen af ​​hvert rør måles. Ikke egnet til mængden Ingen tabuer. Bivirkninger og risici Risiko for infektion: Hvis du bruger en uren nål, kan du risikere infektion.