chylomikroner

Chylomikronerne er de største lipoproteinpartikler i humant plasma, og CM er størstedelen af ​​kosten TG, der leveres fra tyndtarmsabsorptionsstedet til den systemiske cirkulation. CM-rydningshastigheden er hurtig, halveringstiden er 10 min, og den normale person kan ikke registrere det efter 12 timers faste, når lipoproteinet er elektroforeret, er CM ved oprindelsen. Det skal bemærkes, at prøven skal være frisk under serumlipoproteinelektroforese og ikke bør opbevares frosset. Grundlæggende information Specialistklassificering: Fordøjelsesundersøgelsesklassifikation: blodundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Normal. positiv: Hyperlipoproteinæmi type I, hyperlipoproteinæmi type V. Tip: Før undersøgelsen er kosten let, og alkohol er forbudt. Normal værdi Negativ. Klinisk betydning Positiv hyperlipoproteinæmi type I, hyperlipoproteinæmi type V. Positive resultater kan være sygdomme: hyperlipoproteinæmi type I, hyperlipoproteinæmi type V forholdsregler 1. Immunoturbidimetrisk turbiditetsmetode: (1) Med hensyn til antiserum: Den turbidimetriske analyse har højere krav til antiserum end andre metoder. Den turbidimetriske metode er fortrinsvis et polyklonalt antistof. Anti-serum skal være fri for anti-serum. Skal være meget opmærksom på apoA-I ekstraheret fra humant serum for at opnå immunrenhed, kromatografisk renhed og elektroforese renhed, hvilket ikke er muligt i det generelle laboratorium. Antiserumtiter (titer) bør ikke være mindre end 16. På nuværende tidspunkt har apoA-I-antiserum i nogle indenlandske kommercielle reagenser en meget lav titer, så man skal være forsigtig, når man køber kittet. Hvis du ikke har erfaring med at identificere antisera-kvalitet inden køb, skal du bede den kvalificerede enhed om at identificere den. (2) Prøven i den øvre metode (serum) fortyndes 200 gange til manuel drift (100 μl prøve), og hvis det er en præcisionsprøveudtager, kan den fortyndes 20 gange (ved hjælp af 10 μl). For at tilpasse sig betingelserne i forskellige laboratorier (såsom forskellige typer automatiserede instrumenter), skal andelen antigen-antistof være opmærksom på, når der foretages passende modifikationer. Det skal bemærkes, at der ikke bør være noget antigenoverskud i reaktionssystemet, og den lineære øvre grænse bør ikke være lavere end 2,5 g / L. Med andre ord skal mængden af ​​antiserum være tilstrækkelig, ellers er resultaterne lave, når apoA-I er høj i prøven. På nuværende tidspunkt har nogle indenlandske lægemiddelsæt ikke kun en lav anti-serumtiter, men doseringen af ​​prøverne i operationen er for stor (såsom 3 ~ 5 μl), antistoffet er åbenbart utilstrækkeligt, og de målte resultater er uundgåeligt unøjagtige. (3) For at opnå nøjagtig måling skal kalibreringskurveberegningsresultaterne udføres i den apoA-I og B turbidimetriske måling (slutpunktmetode). En bestemt koncentration (lav prøvedosis) -koncentration (X) er dybest set lineær med uklarhed (Y), og lineær regression beregner en bestemt afskæring på Y-aksen (A-værdi <0,1), så afvigelsen fra beregningsresultatet beregnes ved hjælp af enkeltpunktskalibrering. Større kan de målte resultater ikke nøjagtigt afspejle niveauet for højt (højt lavt, lavt højt). Forsøm ikke målingens nøjagtighed på grund af enkelhedens metode. Uanset typen af ​​det automatiserede instrument, skal du først prøve kalibreringskurven. Hvis testen gentages under instrumentets betingelser og de specifikke betingelser, er afskærmningen af ​​regressionslinjen ikke indlysende, kan kalibreringsmetoden med et enkelt punkt anvendes. Når mængden af ​​prøven er 3 til 5 μl, selvom mængden af ​​antiserum forøges, er koncentrationen og uklarheden ikke lineær og kan kun beregnes, når kurven er lineært konverteret. (4) Den største interferensfaktor er uklarheden i selve serumet (såsom serum med højt fedtindhold), og forbehandlingsmetoder, såsom ultracentrifugering eller lipasehydrolyse, er ikke praktiske. Virkningen af ​​uklarhed med overfladeaktive stoffer er også begrænset, så der skal laves et tomt rør i analysen. Ud over den topunktsmetode, der er anvendt i automatiseret analyse, er det en fejltagelse manuelt at bruge et enkelt reagens uden at trække prøveemnet ud. For at reducere matrixeffekten på turbiditetsreaktionen skal serum med fast værdi anvendes som en kalibrator. Derudover skal forstyrrelser som støvpartikler og uklare retter udelukkes. (5) Nogle kommercielle sæt (inklusive nogle importerede produkter) har unøjagtige kalibreringsseraværdier, som er vigtige fejlkilder. 2. Raketelektroforese: (1) Valget af antigenfortyndingsfaktor og mængden af ​​antiserum skal være klart, hældningen af ​​kalibreringskurven er moderat, og justeringskurven er passende. Metoden måler samtidig apoA-I og apoB, og mængden af ​​de to antiseraer skal justeres, så tohøjden for de to er forskellige, og apoB-spidshøjden ikke er mindre end 1 cm. (2) Antisera fra forskellige typer kilder (såsom kaniner og får), testet til den tilsvarende pris, vil resultaterne være forskellige. ApoA-I-assayet er fortrinsvis kaninantiserum. Når kaninserum bruges, er topformen skarp, og toppen, der produceres af fåreserumet, er tyk, spidsspidsen er rund og stump, og nogle gange vises et spøgelsesbillede før toppen. Hældningen af ​​kalibreringskurven for kalibreringsserumet er også forskellig. Uanset hvilket antiserum der bruges, er de kvantitative resultater imidlertid ikke meget forskellige. (3) Elektroforese under visse betingelser, tophøjden på kalibreringsserumet for forskellige fortyndinger ændres ikke markant, og hældningen for kalibreringskurven er dybest set den samme. Hvis prøveens tophøjde overstiger kalibreringskurveområdet, skal prøvefortyndingsfaktoren justeres og testes igen. Inter-board CV er typisk mindre end 5%. (4) Raketelektroforeseresultater kan ses ved farvning eller direkte visuel observation af rakettoppen. Førstnævnte bruger mindre prøver og sparer antiserum, men hvis prøverne og antiserum forøges korrekt, er det mere praktisk at ikke plette. Den anvendte agarose skal være standardelektrosmotisk eller hypotonisk. Hvis der tilføjes en passende mængde dextran eller polyethylenglycol til gelen, bliver raket toppen klarere. (5) Målingen af ​​rakettoppen kan beregne arealet eller spidshøjden, og området er spidshøjden ganget med spidsbredden (bredden ved halvhøjden af ​​toppen). Målenøjagtigheden er fortrinsvis op til 0,1 mm. Der skal anvendes mekanisk eller elektronisk forstærkerudstyr. Spidshøjden i området for standardkurven er fortrinsvis 1 til 4 cm. (6) Denne lov finder anvendelse på analysen af ​​et lille antal prøver. Også egnet til bestemmelse af apoAII, Cl, CII, CIII, D, E og Lp (a). Inspektionsproces 1. Immunoturbidimetrisk turbiditetsmetode: (1) Prøven skal være et hurtigt separerende serum, der kan adskilles i tide. Det kan opbevares i køleskab ved 2 til 6 ° C, målt inden for 1 uge og opbevares ved -20 ° C i et halvt år. (2) Når man bruger en fuldautomatisk analysator, skal forholdet mellem antigen og antistof og reaktionstid med rimelighed vælges i henhold til forskellige instrumentdesignparametre. Det kan også bruges som en hastighedsspredningsnephelometri CM, såsom Beckman turbidimeter ICS eller proteinarray-system). (3) Instrumenter, der bruges i manuel metode: præcisionsfotometer med 340 nm filter (eller splitter), prøvevolumen er fortrinsvis 0,5 ml (for at spare antiserum), fortrinsvis med flow cup, prøvefortynding fortyndes bedst Korrigeret sampler. (4) Prøvebehandling: Serumprøven og kvalitetskontrolserumet fortyndes 1: 200 med et prøvefortyndingsmiddel, dvs. først fortyndet 1:20 (5,0 μl serum + 95 μl fortyndingsmiddel) og derefter fortyndes 1:10 ( Overskud 1:20 serum til bestemmelse af apoB). Efter blanding fik det lov at henstå ved 25 til 37 ° C i 30 minutter og blev uklar ved en bølgelængde på 340 nm. Resultatet blev aflæst på en standardkurve i henhold til A-værdien af ​​U-UB. Denne metode har et CV på <5%. (5) Kalibreringskurve: For hver batch af manuel og halvautomatisk drift kræves en kalibreringskurve, og kalibreringsserumet kan fortyndes i fire koncentrationer på 1: 100, 1: 200, 1: 300 og 1: 400, som er de samme som prøven. Betjening, beregne CM-koncentrationen af ​​hvert standardrør i henhold til den faste værdi, og kortlæg koncentrationen (X) med dens tilsvarende A-værdi (Y) (beregnet ved lineær regression), der stort set er lige, men har en bestemt afskærmning på Y-aksen. Så du kan ikke bruge en enkelt punktstandard. Når operationen er nøjagtig, bør korrelationskoefficienten mellem koncentrationen og A-værdien være over 0,985. Hvis der er tre kalibreringssera ved høje, mellemstore og lave koncentrationer, kan det betjenes på samme måde som prøven og kan bruges til trepunktskalibrering.Det kan også bruges til fempunktskalibrering (dvs. højmediumkoncentrationsserum, der er ens blanding, medium og lav Koncentrationer af serum blev blandet i lige store mængder for at blive de to andre kalibreringssera). Det lineære interval for denne metode: 0,4 ~ 2,5 g / L. 2. Raketelektroforese: (1) hældeplade: 10 g / L agarose 10 ml pr. Plade, smelt i kogende vandbad, bland godt, tilsæt 50 μl CM antiserum og apoB antiserum 8 μl når det er koldt til 50 ~ 55 ° C (mængden afhænger af antiserum titer) ), hurtigt blandes og hældes på glaspladen, der er forudindstillet på vandplatformen, afkøles og placeres derefter ved 4 ° C, efter 20 minutter, stempelhuller, hullet er ved katodens ende af pladen, huldiameteren er 3 mm, hulrummet er mindst 5 mm, og hulkapaciteten er 5 μl. Placer pladen i elektroforesetanken og broen med filterpapir. (2) Fortynding af antigen: Kalibreringsserum blev fortyndet til 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 og 1: 400 (til kalibreringskurve) med 0,15 mol / l NaCl-opløsning, og serumprøven var 1: Fortyndet i 200, anbring køleskabet ved 4 ° C i højst 3 dage. (3) Påfyldning: 5 ul (nøjagtigt) af det fortyndede serum og prøver blev udtaget i en lav strømtilstand (10 mA / plade) og tilsat godt til agarosegelprøven. Hvert bestyrelse skal gøre en række standarder. (4) Tænd: stabil strømning 24 mA / plade, terminal spænding 6 ~ 8V / cm, afkøling med rindende vand for at opretholde agarose 15 ° C, elektroforese 3 ~ 4h. (5) Deproteinisering og tør film: agarosepladen efter elektroforese blev nedsænket i 0,15 mol / l NaCI i 30 minutter, og filmen blev placeret på polyesterfilmen og tørret ved let tryk under et flerlagsfilterpapir. Fugtigheden i limen tørres derefter naturligt med filterpapiret, filmen og polyesterfilmen eller tørres med en varmluftsblæser. Efter tørring adskilles filmen naturligt fra filterpapiret og polyesterfilmen. (6) Farvning: agarosefilmen blev nedsænket i farvningsopløsningen i 20 til 30 minutter. (7) Affarvning: Blødgør den farvede film med en affarvende opløsning, indtil raket toppen er klar, og baggrunden er dybest set farveløs. Det kan klemmes i to stykker cellofan i vand og kan opbevares i lang tid efter tørring. Det kan også blødgøres i rindende vand for at fjerne baggrunden. NOTER: 1 Fortyndingsforholdet mellem antigenet og mængden af ​​antiserum bør vælges, så rakettoppen er klar, hældningen af ​​kalibreringskurven er moderat, og linjen er passende. Metoden måler samtidig apoA-I og apoB, og mængden af ​​de to antiseraer skal justeres, så tohøjden for de to er forskellige, og apoB-spidshøjden ikke er mindre end 1 cm. 2 Forskellige typer antiserums (såsom kaniner og får) testes til den tilsvarende pris, og resultaterne vil være forskellige. ApoA-I-assayet er fortrinsvis kaninantiserum. Når kaninserum bruges, er topformen skarp, og toppen, der produceres af fåreserumet, er tyk, spidsspidsen er rund og stump, og nogle gange vises et spøgelsesbillede før toppen. Hældningen af ​​kalibreringskurven for kalibreringsserumet er også forskellig. Uanset hvilket antiserum der bruges, er de kvantitative resultater imidlertid ikke meget forskellige. 3 Elektroforese under visse betingelser, peakhøjden på kalibreringsserumet i forskellige fortyndinger ændres ikke markant, og hældningen for kalibreringskurven er stort set den samme. Hvis prøveens tophøjde overstiger kalibreringskurveområdet, skal prøvefortyndingsfaktoren justeres og testes igen. Inter-board CV er typisk mindre end 5%. 4 Raketelektroforeseresultater kan observeres ved farvning eller direkte visuel observation af rakettoppen. Førstnævnte bruger mindre prøver og sparer antiserum, men hvis prøverne og antiserum forøges korrekt, er det mere praktisk at ikke plette. Den anvendte agarose skal være standardelektrosmotisk eller hypotonisk. Hvis der tilføjes en passende mængde dextran eller polyethylenglycol til gelen, bliver raket toppen klarere. 5 Målingen af ​​rakettoppen kan beregne arealet eller spidshøjden, og området er spidshøjden ganget med spidsbredden (bredden ved halvhøjden af ​​toppen). Målenøjagtigheden er fortrinsvis op til 0,1 mm. Der skal anvendes mekanisk eller elektronisk forstærkerudstyr. Spidshøjden i området for standardkurven er fortrinsvis 1 til 4 cm. 6 Denne metode er anvendelig til analyse af en lille mængde prøver. Også egnet til bestemmelse af apoAII, Cl, CII, CIII, D, E og Lp (a). Ikke egnet til mængden Ingen. Bivirkninger og risici Ingen.